1 维生素 B1 、维生素 B6 、烟酰胺的测定

1.1 检验依据

本方法参考 GB/T 5009.197-2003 《保健食品中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因的测定》中规定的方法来检测。

1.2 范围

    线性范围：盐酸硫胺素 0.500 μg/ml ～ 50.0 μg/ml ；盐酸吡哆醇 0.500 μg/ml ～ 50.0 μg/ml ；烟酰胺 1.00 μg/ml ～ 100 μg/ml 。

1.3 原理

将混匀的胶囊内容物试样使用甲醇 + 水 + 磷酸 =100+400+0.5 进行提取和稀释，根据高效液相色谱紫外检测器外标法定性定量检测 。

1.4 试剂

除非另有说明，在分析中所用的水为双蒸水。

1.4.1 甲醇：优级纯。

1.4.2 乙腈：色谱纯。

1.4.3 磷酸：分析纯。

1.4.4 硫酸月桂酯钠（ sodium dodecylsulfate ）：高效液相色谱用试剂。

1.4.5 1- 癸烷磺酸钠（ sodium 1-decanesulfonate ）：高效液相色谱用试剂。

1.4.6 标准储备液 A ：准确称量已扣除水分的盐酸硫胺素和盐酸吡哆醇标准品各 0.0500g ，溶于水中并定容至 50ml 。

1.4.7 标准储备液 B ：准确称量已扣除水分的烟酰胺标准品 0.0400g ，溶于水中并定容至 20ml 。

1.4.8 混合标准使用液：准确量取标准储备液 A 5ml ，标准储备液 B 10ml ，再加入甲醇 + 水 + 磷酸 =100+400+0.5 混合溶液至 20ml 。

1.5 仪器

1.5.1 高效液相色谱仪，配备紫外光检测器。

1.5.2 超声波清洗器。

1.5.3 离心机。

1.6 分析步骤

1.6.1 试样处理

取 20 粒以上的胶囊内容物混匀，称取 30mg 内容物试样于试管中（准确至 0.001g ），加入甲醇 + 水 + 磷酸 =100+400+0.5 混合溶液 50ml ，超声提取 5min 后以 3000r/min 离心 5min ，上清液经 0.45 µ m 滤膜过滤后待进样。

1.6.2 色谱条件

色谱柱：色谱柱： TSK C₁₈ 4.6mm × 150mm ， 5μm 。

柱温：室温

检测波长：盐酸硫胺素 260nm ；烟酰胺、盐酸吡哆醇 280nm 。

流动相：盐酸硫胺素：硫酸月桂酯钠溶液（ 5g → 530ml ） + 乙腈 + 磷酸 =530+470+1 ；烟酰胺、盐酸吡哆醇： 1- 癸烷磺酸钠溶液（ 1.22g → 850ml ） + 乙腈 + 磷酸 =850+150+1 。

流速： 1.0mL/min 。

进样量： 10μl 。

1.7 结果计算

Χ=h1 × c × 50 × 0.27/(h2 × m × f × 1000)………………………… （ 1 ）

式中：

Χ —— 试样中单一成分的含量， mg / 片；

h1 —— 试样峰面积 ；

c —— 标准溶液浓度， μg/mL ；

h2 —— 标准溶液峰面积 ；

m —— 试样量， g ；

f —— 为换算系数，其中维生素 B1 （硫胺素）和盐酸硫胺素换算系数为 1.121 ；维生素 B6 （吡哆醇）和盐酸吡哆醇的换算系数为 1.215 ；烟酰胺的换算系数为 1 。

试验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的 10 % 。